2011年公卫执业医师考试辅导：化学致突变物的检测

会计考友

　化学致突变物的检测是公卫执业医师卫生毒理学要求掌握的内容。
　　化学致突变物的检测所观察的现象并不一定就是三类遗传学损伤，而可能是致突变过程中发生的其他作用（事件）。
　　（一）致突变试验的遗传学终点和试验组合的选择
　　将致突变试验观察到的现象所反映的各种遗传学事件称为遗传学终点。遗传学终点分为4类：①基因突变；②染色体畸变；③不分离；④原发性DNA损伤。
　　成组试验组合的原则为：①多个遗传学终点；②原核生物和真核生物；③体外试验和体内试验；④体细胞和生殖细胞。
　　（二）常用的致突变试验方法
　　1.细菌回复突变试验-鼠伤寒沙门菌回变试验（Ames试验）
　　原核生物体外试验、基因突变。
　　鼠伤寒沙门菌试验菌株（突变型）不能自行合成组氨酸，在不含组氨酸的最低营养平皿上不能生长。突变型试验菌株可被各种诱变因素诱导，回复突变成野生型，即恢复了合成组氨酸的能力，可在此平皿上生长成可见菌落。
　　鼠伤寒沙门菌野生型（原养型）←→组氨酸营养缺陷型突变株（his+）　回复突变　（his）
　　如果受试物处理组回变菌落数显著超过阴性对照组；并有剂量反应关系，即可判定受试物为鼠伤寒沙门菌的致突变物。
　　Ames试验中使用的标准菌株为TA97、TA98、TA 100和TA 102.his-突变外，附加突变：①深粗糙型突变（rfa）、②切除修复基因uvrB缺失（△uvrB）和③抗药因子（R因子即抗氨苄青霉素的PKMl01质粒和抗四环素的PAQ1质粒）。
　　TA97和TA98主要用于检测移码型突变；TA100和TA102可检测碱基置换。
　　有点试验和掺入试验两种。应分别进行不加及加代谢活化系统的试验，常用为S9混合液，即用多氯联苯诱导的大鼠肝匀浆经9000 g离心得到的上清液，再加上NADP及葡萄糖-6-磷酸等辅助因子。
　　2.微核试验
　　体内试验，遗传学终点是染色体畸变和不分离。
　　微核是染色体断片或因纺锤体受损伤而迟滞的整个染色体，分裂的后期仍留在子细胞的胞质内。检测断裂剂和有丝分裂毒物。
　　常用的是啮齿类动物骨髓嗜多染红细胞。在主核排出时微核可留在胞浆中。
　　3.染色体畸变试验
　　细胞遗传学检验，即制备中期相染色体标本，在光镜下观察染色体形态结构和数目改变。遗传学终点为染色体畸变。
　　啮齿类动物睾丸细胞染色体畸变试验，用于检测对生殖细胞的染色体损伤作用。
　　4.程序外DNA合成试验
　　DNA受损后，发生在正常复制合成期（S期）以外DNA的修复合成，称为程序外DNA合成（UDS）或DNA修复合成。
　　3H-胸苷掺入量，反映DNA修复合成情况。需将受试细胞分裂阻断同步化于G1期，再用羟基脲抑制残存的S期半保留DNA复制，放射自显影法和液闪计数法确定3H-胸苷掺入量。