2011微生物与寄生虫检验知识辅导：小肠结肠炎耶尔森菌

会计考友

　　一、细菌的传播与致病
　　小肠结肠炎耶尔森菌广泛分布于自然界，是能在冷藏温度下生长的少数几种肠道致病菌之一。本菌天然寄居在多种动物体内，如猪、鼠、家畜等，通过污染食物（牛奶、猪肉等）和水经粪—口途径感染或因接触染疫动物而感染。它除引起胃肠道症状外，还能引起呼吸系统、心血管系统、骨骼结缔组织等疾患，甚至可引起败血症，造成死亡。该菌还是重要的食源性致病菌，很多国家都已将该菌列为进出口食品的常规检测项目。
　　本病多发生于冬春季节，可散发或暴发流行，多累及婴儿及儿童。不同年龄患者的症状有所不同，5岁以下患儿以腹泻为多见，临床表现与菌痢不能区别。本病为自限性的轻型急性胃肠炎，一般表现为腹泻、发热和腹痛，粪便呈黄色水样或含粘液，带血或血便者较少见，腹泻每日3～10次，可持续1～2周，个别可长达3个月。偶可引起肠道溃疡、穿孔和腹膜炎。慢性腹泻常持续数月，甚至可拟似慢性特发性炎性肠病。发热从短期高热到持续几周的低热不等，亦为本病的突出症状。5岁以上儿童和青少年常有下腹痛，末梢血白细胞总数增加，症状极似阑尾炎。在成人中，肠炎后1～2周，有的可出现结节性红斑，常见的并发症为活动性关节炎。此外，尚有脑膜炎及败血症等临床类型。
　　但国内既往对该菌重视不够，医务人员普遍缺乏对本菌的认识，临床医生在对胃肠道疾病诊断时很少考虑小肠结肠炎耶尔森菌感染，检验人员也很少能为准确诊断提供依据。由于诊断不及时，容易造成误诊，多数小肠结肠炎耶尔森菌感染病人很难得到及时、针对性治疗，造成感染慢性化和并发各种合并症，有些小肠结肠炎耶尔森菌感染甚至被当作阑尾炎施行手术。
　　二、细菌的生物学特性
　　小肠结肠炎耶尔森菌肠杆菌科耶尔森菌属，为革兰氏阴性小杆菌，有毒菌株多呈球杆状，无毒株以杆状多见。对营养要求不高，能在麦康凯琼脂上生长，但较其他肠道杆菌生长缓慢，培养的最适宜温度为28℃，最适pH值为7～8，初次培养菌落为光滑型，通过传代接种后菌落可能呈粗糙型。
　　本菌具有“嗜冷性”，在水中和低温下（4℃）能生长，为肠道中能在4℃生长繁殖的少数细菌之一。因此，食品冷藏保存时，应防止被该菌污染。
　　野生动物、家畜（猪、狗和猫）、牡蛎和水源中都能分离到本菌，亦可从健康人或患者粪便中分离得到，其传播方式可能与摄入被尿、粪便污染的食物（尤其是肉类）和接触感染动物等有关。
　　本菌可产生耐热肠毒素，121℃30分钟不被破坏，对酸碱稳定，pH1～11不失活。肠毒素产生迅速，在25℃下培养12小时，培养基上清液中即有肠毒素产生，24～48小时达高峰。肠毒素是引起腹泻的主要因素。毒力型菌株均有VW抗原（蛋白脂蛋白复合物），为毒力的重要因子，与侵袭力有关，侵袭力可能是耶尔森菌感染肠道表现的病理基础。
　　三、细菌的实验室检查及其它检查
　　1.标本采集常为粪便以及食物，也可取血液和尿液等。
　　粪便标本采集要求：采集的动物粪便标本应新鲜，病人的粪便标本最好在发病3-5病日内，使用抗生素之前。粪便采集量每份不少于5克，置于干净塑料袋或置于运送培养基中于6小时内送实验室检测，夏季标本的保存和运送要注意冷藏。原则上每天采集的标本可分两次送至实验室，即上午的标本中午12时前送到，下午的标本晚6时前送到，以便于及时开展检测。
　　2.分离培养——以粪便标本为例
　　（1）冷增菌粪便与改良磷酸盐缓冲液以1：10混合于4℃增菌，并于10天，20天分别转种麦康凯MAC平板或耶尔森菌属专用选择性培养基CIN于25℃培养24～48h.
　　（2）该菌的菌落在MAC平板上呈无色透明，在CIN平板上呈粉红色，偶尔有一圈胆盐沉淀；
　　（3）将可疑菌落接种改良克氏双糖培养基25℃培养24h～48h，上、下层均为阳性（即显黄色）者接种Rustigian氏尿素培养基（使成浓厚菌悬液），振荡10秒钟25℃培养2～4h.
　　（4）尿素阳性者再接种半固体各2管，1管于25℃培养24h，另1管于37℃培养24h.该菌在25℃动力阴性，37℃动力阴性。
　　3.生化鉴定（25℃培养）：典型小肠结肠炎耶尔森菌主要的生化反应情况：脲酶阳性、硫化氢阴性、VP25℃阳性、鸟氨酸脱羧酶阳性。发酵葡萄糖、蔗糖产酸不产气，不发酵密二糖和鼠李糖。
　　4.血清分型
          
　　四、细菌的防治
　　症状较轻时，本病多为自限性，无需抗菌治疗。宜进行适当隔离，粪便及排泄
　　物要消毒，以免疾病传播。有失水者及时补液，以纠正水、电解质、酸碱紊乱。对病程较长，有并发症或呈暴发型者，应给予抗菌治疗。本菌对所有氨基糖甙抗生素、
　　多粘菌素、复方新诺明、四环素、呋喃唑酮和喹诺酮类等均敏感。
　　五、细菌的生物安全防护
　　根据《病原微生物生物实验室生物安全管理条例》中的有关规定，人间传播的微生物名录（待颁布）小肠结肠炎耶尔森菌属于三类，BSL-2.相关的防护事宜包括：
　　（1）操作要求
　　1、实验时，未经实验室主任同意，限制或禁止进入实验室。
　　2、不许在工作区域饮食、吸烟、清洗隐型眼镜和化妆。食物应存放在工作区域以外专用橱柜或冰箱中。
　　3、所有的操作过程应尽量细心，避免产生和溅出气溶胶。
　　4、对于污染的锐器，必须时刻保持高度的警惕，包括针、注射器、玻片、加样器等。
　　5、注射和吸取感染材料时，只能使用针头固定注射器或一次性注射器（即注射器和针头是一体的）。用过的一次性针头必须弯曲、切断、破碎、重新套上针头套、从一次性注射器上去掉，或在丢弃前进行人工处理，要不将之小心放入不会被刺穿的、用于收集废弃锐器的容器中。非一次性锐器必须放置在坚壁容器中，转移至处理区消毒，最好高压杀菌。
　　6、打碎的器皿不能直接用手处理，必须用其它工具处理，如刷子和簸箕、夹子或镊
　　7、所有的培养物、储存物及其它规定的废物在释放前，均应使用可行的消毒方法进行消毒，如高压灭菌。转移到就近实验室消毒的物料应置于耐用、防漏容器内，密封运出实验室。离开该系统进行消毒的物料，在转移前应包装，其包装应符合有关的法规。
　　8、溅出或偶然事件中，明显暴露于传染源时，要立即向实验室主任报告。进行适当的医学评估、观察、治疗，保留书面记录。
　　9、按日常程序、在有关传染源的工作结束后、尤其是传染源溅出或洒出后、或受到其他传染源污染后，实验室设备和工作台面应当使用有效的消毒剂消毒。污染的设备在送去修理、维护前，要按照相关的规定消毒；在离开设施转移前，要按照相关的规定打包运输。
　　（2）安全设备
　　1、正确使用和保养生物安全柜、最好是二级生物安全柜、或其他合适的人员防护设施、或物理遏制装置。
　　2、确定可能形成传染性气溶胶或溅出物的实验过程，包括离心、研磨、匀浆、剧烈震荡或混匀、超声波破裂、开启装有传染源的容器、采集感染标本等。
　　3、涉及高浓度或大体积的传染源时，若选用密封转头或带安全罩的离心机，若转头或安全罩仅在生物安全柜中打开，则可在开放实验室内离心。
　　4、当必须在生物安全柜外处理标本时，需采取面部保护措施（跟镜、口罩、面罩、或其他防溅装置），以免传染源或其他有害物溅或洒到面上。
　　5、在实验室内，必须使用专用的防护性外衣、大褂、罩衫或制服。人员到非实验室区域时，防护服必须留在实验室内。防护服可以在实验室内处理，也可以在洗衣房中洗涤，但不能带回家中。