临床检验技师免疫检验考试辅导：膜载体的酶免疫测定的免疫印迹法

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　　免疫印迹法（immunoblotting test，IBT）亦称酶联免疫电转移印斑法（EITB），因与Southern早先建立的检测核酸的印迹方法Southernblot相类似，亦被称为Western blot.免疫印迹法（图4-10-3）分三个阶段进行。第一阶段为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）。抗原等蛋白样品经SDS处理后带阴电荷，在聚丙烯胺凝胶中从阴极向阳泳动，分子量越小，泳动速度就越快。此阶段分离效果肉眼不可见（只有在染色后才显出电泳区带）。第二阶段为电转移。将在凝胶中已经分离的条带转移至硝酸纤维素膜上，选用低电压（1OOV）和大电流（1～2A），通电45min转移即可完成。此分阶段分离的蛋白质条带肉眼仍不可见。第三阶段为酶免疫定位。将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜（相当于包被了抗原的固相载体）依次与特异性抗体和酶标第二抗体作用后，加入能形成不溶性显色物的酶反应底物，使区带染色。常用的HRP底物为3，3'-二氨基联苯胺（呈棕色）和4-氯-l-萘酚（呈蓝紫色）。