免疫检验考试辅导：免疫组化（LP法）操作步骤

会计考友

　　1.切片常规脱蜡至水。如需抗原修复，可在此步后进行
　　2.缓冲液洗3min/2次。
　　3.为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色，将切片放在Hydrogen Peroxide Block中孵育10-15分钟。
　　4.缓冲液洗5min/2次。
　　5.滴加UltraVBlock，在室温下孵育5分钟以封闭非特异性的背景染色。
　　（注：孵育不要超过10分钟，否则会导致特异性染色降低。如果一抗的稀释液中含有5－10%正常羊血清，这一步可以省略。）
　　6.缓冲液洗5min/2次。
　　7.滴加一抗工作液37℃孵育1－2小时。（具体孵育时间和温度由试验者最终决定）
　　8.缓冲液洗5min/2次。
　　9.滴加Primary Antibody Enhancer（增强子），在室温下孵育20分钟。
　　10.缓冲液洗5min/2次。
　　11.滴加HRPPolymer（酶标二抗），在室温下孵育30分钟。
　　（注：HRPPolymer对光敏感，应避免不必要的光暴露并储存在不透明的小瓶中。）
　　12.缓冲液洗5min/2次。
　　13.向1mlDAB Plus Substrate中滴加1-2滴DAB Plus Chromogen，混匀后滴加到切片上，孵育3－15分钟。（具体时间由染色深浅决定。） 14.自来水充分冲洗，复染，脱水，透明，封片。