免疫检验考试辅导：M蛋白的检测与鉴定

会计考友

　一、M蛋白的基础知识
　　M蛋白是浆细胞或B淋巴细胞单克隆大量增殖时所产生的一种异常免疫球蛋白，其氨基酸组成及排列顺序十分均一，空间构象、电泳特征也完全相同，本质为免疫球蛋白或其片段（轻链、重链等）。由于它产生于单一克隆，又常出现于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、恶性淋巴瘤病人的血或尿中，故称M蛋白。这些M蛋白大多无抗体活性，所以又称为副蛋白。中华考试网
　　M蛋白血症可分为恶性与意义不明的两大类。恶性M蛋白血症多见于多发性骨髓瘤（包括轻链病）、巨球蛋白血症、重链病、7SIgM病（Solomen－Konkel病）、半分子病及不完全骨髓瘤蛋白病（C端基因缺陷）等。意义不明的M蛋白血症又分为两种，一种是与其他恶性肿瘤（如恶性淋巴瘤）伴发者，另一种即所谓良性M蛋白血症。
　　M蛋白的检测方法主要有琼脂或琼脂糖电泳、免疫电泳、免疫固定电泳、选择免疫电泳等。
　　二、M蛋白的鉴定
　　1.多发性骨髓瘤与巨球蛋白血症时的M蛋白检测和鉴定
　　（1）血清总蛋白定量。90%的患者血清总蛋白含量升高（70%的患者＞100g／L），约10%的患者正常或甚至偏低（如轻链病时）。
　　（2）血清蛋白醋纤膜或琼脂糖电泳。M蛋白在电泳时出现典型的单株峰（亦称M区带），特点是区带窄而浓，扫描时呈现尖高峰，在γ区高比宽≥2，在β区≥1.此M区带可因Ig的不同而出现在在γ～α2的任何区域。M蛋白增殖的另一特点是其他各区带明显减少，显示图像较简单。有时有的患者血中M蛋白并不高，这是由突变细胞的Ig分泌能力决定的。这种病人的血清在电泳时M峰可不明显，易被其他蛋白掩盖，需采用稀释血清成应用其他敏感方法如免疫固定电泳来检测。
　　（3）血清Ig定量。一般M蛋白所属Ig含量均显著增高，其他类Ig则正常或显著减低。
　　（4）免疫电泳。
　　①正常人血清免疫电泳结果：可分辨出20多种蛋白成分。在阳极端有船形很浓的沉淀线为白蛋白。通常Ig组分靠阴极端，最靠近加样孔者为IgM，依次为IgA、IgG，三者成平滑的连续沉淀线。
　　②多发骨髓瘤：多发性骨髓瘤分IgG、IgA、IgM、IgI）和IgE5种，IgG和IgA又分亚类，所有Ig的轻链又分两个型。因此，免疫电泳时变形沉淀线的位置随各分子的电泳区带不同而异，从慢γ～β2区皆可出现。IgG1多出现在慢γ区，IgG4在β～α2区。M蛋白与相应的抗重链血清、抗轻链血清形成迁移范围十分局限的浓密的沉淀弧。由于此种病人血清中Ig含量甚高，免疫扩散时可出现抗原绝对过剩而不出现沉淀线，此时需稀释血清重做，往往可获得满意结果。③巨球蛋白血症：由于IgM分子大量增殖所致。在免疫电泳时，常常出现以下特征：一是沉淀线明显变形。正常情况下，IgM形成短小沉淀线，不易看到变形。当IgM大量出现时，则会使整个IgM沉淀线变形。二是抗原孔周围和电泳纵轴出现团块状沉淀。三是电泳时IgM组分无迁移，这多是IgM分子聚合，电泳不移动所致。
　　（5）尿本－周蛋白检测。
　　①定性检测：用热沉淀法和磺基水杨酸法。
　　②免疫电泳法：用待检尿浓缩后进行免疫电泳，大多数多发性骨髓瘤病人和轻链病患者，仅出现一条致密的弓形弯曲的沉淀线。本法60%～80%的骨髓瘤病人和几乎全部轻链病病人可检出尿本周蛋白。
　　③轻链白蛋白－戊二醛交联免疫电泳法：多发性骨髓瘤、华氏巨球蛋白血症及轻链病可呈阳性，正常人阴性。本法尿本周蛋白检出率为100%，假阳性4%，尿中含有200μg／ml时即可出现阳性结果。
          
　　2.重链病时M蛋白检测与鉴定
　　与多发性骨髓瘤相同，免疫电泳时由于重链分子较Ig分子小，故迁移率快，电泳位置较靠阳极侧（β～α）。但重链病一般需选择免疫电泳证实。
　　3.7SIgM病时M蛋白的检测与鉴定
　　一般IgM为五聚体，沉降系数为19S，而7SIgM患者的IgM为单体，沉降系数为7S.证明7SIgM有两种方法：一种是在测定IgM总量后，将被测血清1～2ml过Sepharose6B柱，再根据洗脱峰图用面积仪测出7SIgM占总IgM的百分比，与IgM总量换算即得7SIgM的绝对值。另一方法即为植物血凝素（PHA）选择电泳。此法原理是五聚体IgM可与PHA结合形成沉淀，而单体IgM不与PHA结合。在琼脂胶中加入PHA，后进行电泳，五聚体IgM被PHA所阻留，而7SIgM继续向阳极泳动，并可与随后加至抗体槽中的IgM抗血清反应，形成单一沉淀弧。
　　4.半分子病时M蛋白检测与鉴定
　　所谓半分子病（half－molecule）是指此种M蛋白由一条重键和一条轻链组成，分子量是正常Ig分子的1／2或＜1／2（因半分子病肽链往往有部分缺失）。至今报告过IgG和IgA的半分子病。除上述检测方法外，尚须对“半分子”进行特殊鉴定。方法有：
　　①免疫电泳法鉴定半分子M蛋白的迁移率。电泳时发现具有IgG或IgA的电泳特征而迁移率明显快于二者时（泳向正极可达α2区），应注意有无本病的可能。
　　②十二烷基硫酸钠（SDS）－聚丙烯酰胺凝胶电泳，推算M蛋白的分子量。
　　③超速离心分析，测定M蛋白的沉淀系数。
　　④Fc抗原决定簇的确定。用相应抗重链血清对比患者与正常人相应Ig的区别。
　　5.测定免疫球蛋白轻链型筛选M蛋白
　　正常人有五类免疫球蛋白，其轻链有两种型，即κ型或λ型。对于每个Ig分子而言，其轻链只有一种，不是κ就是λ。但对一个体的Ig分子而言，则有κ和λ两种链型，且其比例基本上是固定的，即κ／λ约为2∶1.任何原因引起的Ig分子多克隆增殖，如慢性肝病，系统性红斑狼疮、某些恶性肿瘤时，其κ／λ值不变。而M蛋白发生时，是单克隆细胞的恶性增殖，所以在Ig量明显增高的同时，其κ／λ比值必然发生改变，即一种轻链型的Ig分子增多。利用适当的方法，分别定量测定血清中κ、λ型Ig分子的量，即可特异而简便地诊断M蛋白病。测定方法有两种，一是用浊度测定技术分别测定含κ或λ的Ig的量，一种是用单相免疫扩散法测定κ型、λ型Ig的含量及比值。单扩法是在琼脂凝胶板上打孔，排列呈梅花型，中心孔注入抗κ、抗λ混合抗体，周围孔放正常人及患者待测血清，然后进行扩散。正常血清与抗血清之间可见对称双线。若患者的κ轻链Ig升高，其沉淀线向内移，而λ线有不同程度向外移，双环间距增宽。若λ轻链Ig含量增高，则表现为环距减小、融合或跨环现象。此外，该法对IgG、IgA、IgD类型的轻链诊断准确率较高，而对IgM型诊断不够理想，其原因是IgM分子大，扩散迁移率小，同时五聚体立体结构也影响了抗轻链抗体与轻链结合。若用二疏基乙醇处理将IgM解为单体，则阳性率大大提高。
　　6.良性M蛋白血症
　　良性M蛋白血症主要指那些血清中存在电泳均质的免疫球蛋白或其片段，但无临床症状，长期观察也未发现骨髓瘤或世球蛋白血症的病人。老年人中发现良性M蛋白血症者较多，应注意与多发性骨髓瘤相鉴别。