生化检验辅导：蛋白酶活力测定

会计考友

照品溶液的制备 精密称取经 105℃干燥至恒重的酪氨酸 适量，加盐酸溶液〔取1mol/L盐酸溶液65ml，加水至1，000ml 〕制成每1ml 中含0.5mg 的溶液。
供试品溶液的制备 取本品适量，精密称定，用上述盐酸溶液制成每1ml 中约含 0.2 ～0.4 的溶液。
测定法 取试管6 支，其中3 支各精密加入对照品溶液1ml ，另3 支各精密加入供 试品溶液1ml ，置37±0.5 ℃水浴中，保温5 分钟，精密加入预热至37±0.5 ℃的血红 蛋白试液5ml ，摇匀，并准确计时，在37±0.5 ℃水浴中反应10分钟。立即精密加入5% 三氯醋酸溶液5ml ，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液备用。另取试管2 支，各精密 加入血红蛋白试液5ml ，置37±0.5 ℃水浴中保湿10分钟，再精密加入 5％三氯醋酸溶 液5ml ，其中1 支加供试品溶液1ml ，另1 支加上述盐酸溶液1ml ，摇匀，滤过，弃去 初滤液，取续滤液，分别作为供试品和对照品的空白对照，照分光光度法（附录Ⅳ A） 在275nm 的波长处测定吸收度，算出平均值ＡS 和Ａ，按下式计算。
每g含蛋白酶活力单位数＝（Ａ×Ｗｓ×ｎ）/（Ａs×Ｗ×10×181.19）
式中
ＡS 为对照品的平均吸收度；Ａ为供试品的平均吸收度；Ｗs ＝1ml 对照品溶液中含酪氨酸的量，μg ；Ｗ＝供试品取样量，g ；ｎ＝供试品的稀释倍数。
在上述条件下，每分钟能催化水解血红蛋白生成1 μmol 酪氨酸的酶量，为一个蛋 白酶活力单位。